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La transferencia de embriones es una técnica de reproducción asistida mediante la cual se transfiere un embrión desde el útero de una yegua donante al útero de una yegua receptora que llevará el embarazo a término. El embrión generalmente se recupera de la yegua donante mediante lavado uterino (lavado) alrededor de 6 a 8 días después de la ovulación. El embrión se coloca en el útero de una yegua receptora sincronizada.
Ventajas
Desventajas
El éxito de este procedimiento depende de la capacidad de controlar cualquiera de los siguientes factores:
Equipo para transferencia de embriones
Iniciar un programa de transferencia de embriones requiere establecer un laboratorio especializado. El equipo de transferencia de embriones está disponible comercialmente en la mayoría de las compañías que venden suministros de cría equina. Además del equipo habitual utilizado para la reproducción asistida de rutina, como una máquina de ultrasonido, se requiere lo siguiente:
El medio de lavado más comúnmente utilizado para la transferencia de embriones es la solución salina tamponada con fosfato de Dulbecco (DPBS) suplementada con un 10 por ciento de suero de ternera fetal y antibióticos. Este medio también se usa para lavar y transferir el embrión al útero del receptor. El medio puede comprarse en forma líquida o en polvo y reconstituirse en el laboratorio. Como alternativa al DPBS, que es costoso, algunos profesionales utilizan en su lugar la solución de timbre con lactato.
Antes de intentar la recuperación del embrión, todos los utensilios y medios deben calentarse a la temperatura corporal en una incubadora para evitar el choque frío del embrión. Todo el equipo debe ser desechable o lavarse adecuadamente y esterilizarse antes de su uso. No se deben usar detergentes o desinfectantes para lavar el equipo de transferencia de embriones, ya que pueden dejar residuos que podrían comprometer la viabilidad del embrión. El equipo se lava solo con agua tibia del grifo y luego se enjuaga bien con agua destilada. Los catéteres, tubos y filtros reutilizables deben esterilizarse con gas antes de su uso.
Los catéteres de Foley separados deben reservarse para los procedimientos de recuperación de embriones y no mezclarse con los utilizados para lavar el útero de yeguas con infecciones.
Elegir destinatarios para la transferencia de embriones
Vale la pena invertir tiempo y dinero en la elección de receptores óptimos, ya que sería un desperdicio invertir recursos y experiencia en la cría de una yegua donante y recuperar un embrión y luego colocarlo en el útero de una yegua que no podría llevar un potro. término. Por lo tanto, todas las yeguas compradas con el propósito de convertirse en receptoras de un programa de transferencia de embriones deben someterse a un examen completo de aptitud reproductiva. Todas las yeguas que ingresan al programa receptor deben pasar todos los aspectos de la EEB y tener un endometrio saludable (revestimiento del útero) cuando se evalúan en una muestra de biopsia.
La edad de los destinatarios también es importante. Es más probable que una yegua madura pero relativamente joven (de 5 a 8 años) pueda llevar un potro a término. A menudo, las yeguas compradas como destinatarios se adquieren a través de subastas públicas y se desconoce la edad. Uno debe confiar en evaluar la edad mediante la evaluación de los dientes.
Idealmente, las yeguas en un programa receptor deben elegirse de acuerdo con un tamaño del cuerpo similar o ligeramente mayor que el tamaño de la raza de la yegua donante. Se sabe que el tamaño de la yegua influirá en el tamaño del potro, independientemente del aporte genético del donante.
Finalmente, vale la pena elegir yeguas con una buena predisposición, no solo porque serán mucho más fáciles de manejar durante todo el proceso, sino también porque pueden ser mejores madres. En este sentido, conocer los antecedentes de una yegua y elegir una yegua que haya parido sin incidentes en el pasado debería ser ideal. No solo sabrías con certeza que la yegua es capaz de llevar un potro a término, sino también la maternidad de la yegua. Desafortunadamente, a menos que lo proporcione el cliente, a menudo se desconoce el pasado de las yeguas receptoras.
Protocolo de sincronización para donantes y receptores
Se utilizan muchos protocolos de sincronización para donantes y receptores, según las preferencias personales y la experiencia. Se administran hormonas al donante y a los receptores para que manipulen su ciclo de celo con el objetivo de que todos entren en celo al mismo tiempo. Estos tratamientos pueden variar desde administrar a las yeguas una sola inyección de prostaglandina hasta colocar a las yeguas en un programa de tratamiento completo de inyecciones de progesterona y estrógenos.
Aunque engorroso, una serie de inyecciones de progesterona / estrógeno proporcionan la mejor sincronía entre el donante y los receptores. Brevemente, el protocolo consiste en una inyección diaria de una combinación de progesterona y estrógeno durante 8 a 10 días (150 mg de progesterona más 10 mg de estradiol-17b por inyección). Esto suprime las hormonas propias de la yegua, y cuando se suspende el tratamiento, la mayoría de las yeguas deben entrar en celo en 3 a 5 días. Debido a que algunas yeguas pueden ovular durante el tratamiento, generalmente se administra una inyección de prostaglandina al final de la serie de progesterona-estrógeno para una mejor sincronía.
Los progestágenos orales comercializados para mantener a las yeguas fuera del calor no funcionan tan bien para los protocolos de sincronización.
Una vez que el donante y los receptores están en celo y la yegua donante es criada al semental apropiado, se puede inducir la ovulación en todas las yeguas dándoles una inyección de gonadotropina coriónica humana. Esto asegurará una sincronía de ovulación más estrecha entre el donante y el receptor. Un receptor es ideal si ovuló el mismo día o un día después del donante. Los receptores menos ideales son aquellos que ovulan un día antes o más lejos de la fecha de ovulación del donante.
Desafortunadamente, incluso los mejores protocolos de sincronización pueden fallar y los donantes y receptores pueden no siempre entrar en calor sincronizado y ovular como se esperaba. Esta es una buena razón para tener siempre más de un destinatario disponible para cada yegua donante. Se recomiendan al menos dos receptores por donante, tres serían ideales.
Manejo de la cría de la yegua donante
El primer factor limitante para el éxito del programa de transferencia de embriones es que la yegua donante debe quedar embarazada. Por lo tanto, es imperativo practicar un buen manejo de reproducción de la yegua donante.
La yegua donante puede criarse con semen fresco o refrigerado transportado. Es importante que el semen sea de buena calidad y que el semental tenga buenas tasas de embarazo establecidas. Obviamente, el semental ideal para una yegua no siempre se elige con respecto a su potencial de fertilidad. Sin embargo, los sementales viejos y subfértiles deben evitarse para evitar la introducción de otro factor que pueda impedir el éxito del programa de transferencia de embriones. Por esta misma razón, se debe evitar el uso de semen congelado-descongelado.
El manejo óptimo de la cría consiste en criar una yegua durante el celo lo más cerca posible de la ovulación. Idealmente, el tracto reproductivo del donante y los receptores debe examinarse diariamente mediante palpación y ecografía por recto para determinar el momento óptimo para criar al donante y evaluar la sincronía con los receptores.
Alrededor de la reproducción, el donante debe recibir una inyección de gonadotropina coriónica humana para inducir la ovulación, y los receptores son tratados de manera similar (pero no criados) para una sincronía de ovulación más estricta.
La ovulación siempre debe confirmarse mediante un examen de ultrasonido. El día de la ovulación se considera 'día 0' y el útero de la yegua donante generalmente se ruboriza el día 7 después de la ovulación.
Procedimiento de recogida de embriones
La recuperación de embriones de la yegua donante generalmente se realiza en el día 7 postovulación. Primero, la yegua se revisa mediante palpación y ecografía por recto para determinar el tono y la apariencia del útero. Una yegua que está embarazada probablemente tendrá un útero muy tonificado y homogéneo, un cuello uterino cerrado y no habrá líquido en el útero como se visualiza con el ultrasonido. En este momento, el embrión es demasiado pequeño para ser visto en la ecografía.
La yegua se prepara para la recuperación del embrión limpiando el área perineal (vulva, ano y glúteos) con exfoliante de povidona yodada (Betadine) tres veces, y enjuagando bien con agua después de cada exfoliante. Después de un enjuague generoso, el área se seca con toallas de papel limpias.
La persona que realiza la recuperación de transferencia de embriones debe usar mangas de palpación limpias y guantes estériles, y se debe usar una gelatina estéril a base de agua para la lubricación. Se introduce una mano en la vagina de la yegua para pasar el catéter de Foley a través del cuello uterino hasta el cuerpo del útero. Luego, el globo del catéter se infla con aire, usando una jeringa pequeña, y por lo tanto se aloja de forma segura dentro del cuello uterino para evitar la pérdida de líquido durante el lavado uterino.
Se necesitan al menos dos personas para realizar el procedimiento de recolección de embriones, uno que sostiene el catéter dentro del tracto de la yegua y un asistente que ayuda con la inserción y recuperación de líquidos. Se introduce un litro de líquido en el útero de la yegua por gravedad, luego se recupera en un cilindro de vidrio grande o se pasa directamente a través de un filtro para atrapar al embrión. Esto se repite tres veces.
Se debe mantener un poco de líquido dentro del filtro de recuperación, para evitar que el embrión se seque. Una vez que finaliza el procedimiento de recuperación, el líquido dentro del filtro se decanta en una placa de Petri. La búsqueda del embrión se realiza bajo aumento con un microscopio de disección.
Procedimiento de transferencia de embriones
Si la recuperación se realiza el día 7 postovulación, el embrión debe estar en la etapa de blastocisto y debe ser fácil de visualizar bajo un microscopio de disección por un operador experimentado.
Una vez encontrado, el embrión se lava en DPBS estéril con suero de ternera fetal al 10 por ciento. Los embriones se pueden manipular con pajuelas de congelación de semen francés de 0,25 ml o pipetas de vidrio conectadas a un bulbo de goma oa una pequeña jeringa de tuberculina.
El embrión se transfiere comúnmente por vía transcervical, es decir, a través del cuello uterino de la yegua como si realizara una inseminación artificial. Para este propósito:
Otra posibilidad es realizar una transferencia quirúrgica de embriones. Esto se hace con el receptor sedado en posición de pie a través de una incisión en el costado que permite la exteriorización del asta uterina. No hay una ventaja obvia en la transferencia quirúrgica de embriones, y el procedimiento es más traumático para la yegua receptora.
En algunos casos, los propietarios o profesionales que realizan la transferencia de embriones eligen no tener receptores de embriones para una yegua donante determinada. Esto evita las molestias de comprar, verificar y mantener los destinatarios, así como los gastos y el trabajo relacionados con la sincronización. En este caso, el embrión recuperado se puede enviar a un centro de referencia que tiene numerosos destinatarios disponibles para su transferencia en cualquier momento. Los inconvenientes de esta alternativa son los riesgos relacionados con el envío de un embrión y también que las tasas de embarazo pueden reducirse ligeramente cuando un embrión no se transfiere inmediatamente después de la recolección.
Para el envío, los embriones se empaquetan en un vial estéril que contiene un medio comercializado, Hams F-10, que se amortigua al difundirlo con una mezcla de 90 por ciento de nitrógeno, 5 por ciento de oxígeno y 5 por ciento de dióxido de carbono. El medio preparado puede solicitarse en la instalación de transferencia justo antes de realizar el procedimiento de recuperación de embriones. Este medio también se complementa con suero de ternera fetal y antibióticos.
Una vez recogido y lavado, el embrión se coloca en un vial de plástico estéril de 3 ml que contiene medio tibio equilibrado, y luego se coloca dentro de un tubo de centrífuga que contiene medio de 50 ml, como medida de precaución.
El tubo de 50 ml se empaqueta en un Equitainer para envío refrigerado.
Los embriones empaquetados deben enviarse por aerolínea o servicio de mensajería nocturno, y transferirse tan pronto como lleguen a la instalación de transferencia, de manera óptima antes de las 24 horas posteriores a la recuperación.
